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在漫威多元宇宙的65号宇宙中，一名女高中生格温多林·马克欣·“格温”·史黛西（Gwendolyn Maxine “Gwen” Stacy）被一只受到放射性感染的蜘蛛咬伤后获得了蜘蛛般的超能力并成为了一位名叫“女蜘蛛侠”的女超级英雄。格温和她的朋友玛丽·简·沃森、贝蒂·布兰特和格洛丽·格兰特组成了一队乐队“玛莉·珍斯”，格温是乐队中的鼓手。
在格温开始打击犯罪后不久，她的一位高中同学兼好友彼得·帕克试图报复在学校欺负他的人，在注射了自己制造的血清后成为了“蜥蜴人”。虽然格温最后成功制服了彼得，但由于彼得使用了化学品，在战斗结束后死在格温的怀里。格温亦因为彼得的死而受到责备，在《号角日报》的总编辑J·乔纳·詹姆森的影响下，格温成为了纽约市警察局的头号目标。她的父亲兼纽约市警察局长乔治·史黛西与法兰克·卡索探长和侦探琴·德沃尔夫开始追捕她。某次，当“玛莉·珍斯”在一场音乐会上表演时，乔治派出了一名刺客混入在观众席中。虽然女蜘蛛侠成功击败了刺客，但却被乔治持枪指向自己，此时，格温脱下她的面罩。乔治得知女蜘蛛侠的身份就是自己的女儿后感到非常震惊，并告诉她在他改变主意之前快逃走。
纽约市的黑帮头目马特·梅铎在知道女蜘蛛侠的真实身份后曾经打算以此要胁乔治，但被乔治拒绝。另一方面，创造出那只咬伤格温的放射性蜘蛛的犯罪组织“蛛丝”为了抢回成果而开始对付女蜘蛛侠。
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